蛋白质组学

  • TMT的原理是什么?TMT 标记定量实验流程是什么?

    TMT的原理:

    Tandem Mass Tag? (TMT?) 是 Thermo Scientific公司的专利产品,用于标记不同的蛋白样品并同时进行高通量的 LC-MS/MS 的定量研究 。目前有 2-、6-、10- 等 3种通量类型,可分别平行处理 2个、6个和 10个样品,显著提高了蛋白样品质谱检测的通量,减少所需质谱机时;同时,由于采用了稳定同位素标记不同样品,在标记实验之后所有样品混合成一个进行后续处理,大大降低了实验误差,使得定量准确性显著提高。

    TMT 标记定量实验流程:

    2-、6-、10-个样品分别提取总蛋白,取等量蛋白进行 Trypsin 酶切,得到相应样品的多肽;分别用不同的 TMT 标签对 2-、6-、10- 个样品进行标记,随后等量混合成一个样品并进行LC-MS/MS 分析和后续的数据库比对,鉴定出样品中含有哪些蛋白以及每个蛋白在样品中相对含量。

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