TMT标记定量技术

  • 简介
  • 技术优势
  • 实验流程
  • 应用领域
  • 仪器平台
  • 样品要求
  • Thermo ScientificTM公司的TMT (Tandem Mass Tag)标记定量技术和AB SCIEXTM公司的iTRAQ技术都属于二级报告离子定量技术,具有相似的原理(图1):提取样品中的总蛋白并酶解为多肽,多肽N-term以及末端Lysine侧链基团的游离氨基能够与TMT标签进行共价结合,从而使每条多肽都带上至少一个TMT标签;不同TMT标签具有相同的分子量,但是却有不同的同位素分布,来自不同样品的相同多肽在MS1中同时被分离,经裂解后在MS2中释放出reporter,代表该多肽在对应样品中的相对含量。TMT (iTRAQ)最高可同时标记10 (8)组不同的生物样品,且一次性完成全部样品的定性定量分析,显著的提高了实验通量,降低了定量误差,可发现更细微的生物学差异。

                                         图1. TMT标签结构和定量原理。                                        



  • ●通量与深度的完美结合

           在质谱本身高通量的基础上,TMT技术又进一步扩大了这种优势,相比SILAC、Dimethyl等标记定量技术,TMT可同时完成多至10个不同样品的定量分析;运用high pH反相HPLC分级为8个组分,每个组分再经low pH反相HPLC分离,两次正交液相分离,显著的提高了鉴定和定量深度。
    ●特异性与灵敏度兼备:

           基于质谱的蛋白质组学精确到单个氨基酸位点,蛋白鉴定准确,灵敏度高,是profiling分析和PTM研究的强大工具。
    ●严格的质量控制:

           数据稳定、重现性好,定量动态范围广,多个样品平行处理极大的降低了实验误差。
    ●专业的数据分析:

           标准的搜库流程,专业的统计和生信分析,出版级的图表展示,完整全面的分析报告。




  • ●疾病标志物筛选
    ●分子机制研究
    ●药物作用靶点研究
    ●特殊功能蛋白质筛选

  • Thermo Scientific EASY-nLC 1200

    Thermo Scientific Q Exactive




  • 样品类型 样品要求
    蛋白质提取物 浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >200μg
    细胞样品 细胞量 >5×106
    组织样品 动物、微生物组织湿重  >100mg
    体液样品 血液体积 >500μl,血清、血浆、脑脊液>500μl,尿液>50ml
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