环状RNA实时定量PCR

  • 简介
  • 实验流程
  •        circRNA是目前生命科学领域新兴的研究热点分子之一。区别于传统的线性RNA,circRNA具有独特的闭合环状结构,使得其对核酸酶不敏感,所以比线性RNA更为稳定,非常适合作为临床诊断标志物(biomarker)。近期研究表明,circRNA主要通过吸附miRNA抑制后者对相应靶基因的调控,称之为竞争性内源RNA(ceRNA),而与疾病相关联miRNA的相互作用说明circRNA对疾病的调控起着非常重要的功能。

    Aksomics(康成生物)为您提供一站式的circRNA实时定量PCR技术服务,您只需要提供保存完好的组织或细胞样本,本公司专业技术服务人员就可为您完成circRNA实时定量PCR实验操作和数据分析,提供您完整的实验报告,为你节省大量的时间和精力。

  • 1. 独特的引物设计

           由于circRNA独特的闭合环状结构,在进行实时定量PCR检测的时候需要更为特异的引物设计;针对circRNA特异的back splicing site,引物设计在该位点两侧(如下图),即“外向引物”(区别于线性RNA的内向引物)。



    2. 样品RNA抽提

           a.组织样本:取适量(50-100mg)新鲜组织或正确保存的组织样本,匀浆后用Trizol试剂抽提RNA。

           b.细胞样本:取1×106-1×107细胞,PBS清洗细胞,吸去PBS后用Trizol试剂抽提RNA。

    3. RNA质量检测

           a.紫外线吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值,获得RNA的浓度及并通过  A260/A230及A260/A280的吸收比值判定RNA的纯度;

           b.甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性。

    4. 逆转录合成cDNA

           利用random primer进行RT反应,合成cDNA。

    5. 实时定量PCR

           以合成的cDNA作为模版进行实时定量PCR扩增;同时检测每个样本中内参基因的表达量,校正上样误差。

    6. 分析结果、提供实验报告

           分析实时定量PCR结果,提供实验报告,包括详细的实验方法、实时定量PCR实验数据和图表。



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